העבודה בבית המקדש, התחלקה בין כהנים רבים, אולם ביום כיפור, נעשתה כולה ע"י הכהן הגדול בלבד.
ביום כיפור עצמו, את העבודות "הרגילות" (שנעשות בכל יום או מועד) - ביצע כשהוא לבוש בשמונת בגדי הזהב. לעומת זאת, את העבודות "המיוחדות" של יום כיפור - ביצע בארבעת בגדי לבן (פשתן) - כתונת, מכנסים, מצנפת ואבנט.
חז"ל קיבלו במסורת כי 5 פעמים טבל הכהן ביום כיפור ו- 10 פעמים קידש את ידיו ורגליו מהכיור.
להלן תיאור סדר העבודה:
